色譜柱的使用和維護注意事項

色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會(huì )降低柱效，縮短使用壽命甚至損壞.在色譜操作過(guò)程中,需要注意下列問(wèn)題,以維護色譜柱． 

①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動(dòng)．溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì )影響柱內的填充狀況；柱壓突然升高或降低也會(huì )沖動(dòng)柱內填料，因此在調節流速時(shí)應該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)的轉動(dòng)不能過(guò)緩。

②應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?nbsp;

③一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去柱內的雜質(zhì)．否則反沖會(huì )迅速降低柱效． 

④選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞．有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠，預柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預先被硅膠＂飽和＂，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解．

⑤避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱骨需要對樣品進(jìn)行預處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護柱．保護柱一般是填有固定相的短柱．保護柱可以而且應該經(jīng)常更換． 

⑥經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質(zhì)，在進(jìn)行清洗時(shí)，對流路系統中流動(dòng)相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規分析需要50-75ｍl。 

⑦保存色譜柱時(shí)應將柱內充滿(mǎn)乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間。 

⑧色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時(shí)應更換濾片或將其取出進(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。 

     通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內使用。柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂。新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降。 每次工作完后，用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線(xiàn)平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會(huì )腐蝕不銹鋼管道，不宜長(cháng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應每隔4~5天開(kāi)機沖洗15分鐘。

9.色譜柱的保養：當柱子和色譜儀聯(lián)結時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈； 要注意流動(dòng)相的脫氣； 

避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相； 進(jìn)樣樣品要提純； 嚴格控制進(jìn)樣量； 

每天分析工作結束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品； 每天分析測定結束后，都要用適當的溶劑來(lái)清洗柱； 若分析柱長(cháng)期不使用，應用適當有機溶劑保存并封閉；